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一、結果與分析

1.細胞融合備用小鼠的效價與敏感性結果免疫小鼠血清抗體效價均達到1∶104，說明獲得較好的免疫效果，其中3號小鼠效價最高為1∶（5．12×104）。以Mo6＋在3．906～1　000μg／L時與過量EDTA鰲合后形成的鰲合物為抑制劑，5只小鼠的抗血清均產生了抑制。其中3號小鼠抑制效果最好，將其A450值轉化為B／B0，以B／B0為y軸，以Lg［Mo6＋－EDTA］為x軸，再對Lg［Mo6＋－EDTA］進行回歸分析，3號小鼠的線性回歸方程為y＝－32．185x＋96．364，r為0．977　1，IC50為27．57μg／L。3號小鼠的抑制曲線見圖1。

2.Mo6＋－EDTA　mAb雜交瘤細胞株的建立雜交瘤細胞株的篩選：細胞融合10d后觀察融合效果，4塊細胞培養板384孔中有雜交瘤克隆形成的有375孔，融合率為97．6％；同時進行間接ELISA和阻斷ELISA檢測，陽性48孔，陽性率為14．7％；3次亞克隆后獲得4株雜交瘤細胞，分別命名為1E3、2D7、2F10、4B3。雜交瘤核型鑒定：NS0染色體數目為62～68條，小鼠脾細胞染色體數目為40條，本試驗獲得的4株雜交瘤染色體數目分別為98．3條、99．32條、98．1條、102條，平均99．4條，高于兩個親本的染色體數目，說明4株雜交瘤確實是兩親本細胞融合后的雜交體。雜交瘤細胞的穩定性測定結果：4株雜交瘤凍存前細胞培養上清效價與凍存15d、30d、60d復蘇培養后上清效價基本一致，說明4株雜交瘤細胞分泌抗體的穩定性良好。

3.Mo6＋－EDTA－mAb的免疫學特性鑒定效價測定　篩選出4株雜交瘤細胞，其中4B3株抗體效價最高，細胞培養上清效價為1∶（3．6×102），腹水效價為1∶（5．12×105）。敏感性測定　敏感性結果見表1，4株雜交瘤細胞株抑制曲線。4株雜交瘤細胞株均獲得較好的敏感性。4株雜交瘤細胞的Mo6＋－EDTA－mAb對Mo6＋－EDTA均具有較高的敏感性；其中4B3細胞株的敏感性最高。特異性鑒定　4B3雜交瘤細胞的mAb的交叉反應試驗結果可知，4B3雜交瘤細胞的mAb對Mo6＋－EDTA的IC50為23．4μg／L，對Cr3＋－EDTA的IC50為28．59μg／L，具有較高交叉反應率；與其他金屬離子螯合物交叉反應性較低可忽略不計。

二、討論

1.Mo6＋－EDTA－pAb的免疫學特性鑒定抗體的免疫學特性主要體現于抗原抗體反應的結合容量、親和性和選擇性3個方面。結合容量大小以效價來衡量，本試驗采用間接ELISA測定其效價，免疫動物后均獲得較高的效價，效價最高達到1∶（5．12×104）。由于pAb為異源性抗體，其親和性不均一，測得Ka值的準確性不高，所以本試驗親和性得檢測用敏感度來衡量，敏感度是由抗原抗體反應的親和性決定的，用IC50值計算靈敏度，代表標準品對抗原抗體結合50％是的抑制質量濃度，IC50值越小，靈敏度越高。本試驗中2號鼠產生的pAb的IC50值為37．94μg／L，在免疫鼠中最低，親和性最好。本研究采用交叉反應試驗鑒定其特異性，結果表明免疫鼠產生的Mo6＋－EDTA　pAb均具有較高的特異性。

2.雜交瘤細胞株的篩選方法制備高質量的mAb需要建立可靠的雜交瘤細胞篩選體系，一般有3條要求，一是準確測定上清效價，二是能夠避免橋抗體的產生，三是確定mAb的特異性。本試驗同時采用間接ELISA和阻斷ELISA篩選陽性雜交瘤，以Mo6＋－ITCBE－OVA作為包被原采用間接ELISA法測定上清效價，Mo6＋－EDTA作為標準品采用阻斷ELISA法確定陽性雜交瘤，可以簡便地篩選出效價高、無橋抗體、特異性強的Mo6＋螯合物雜交瘤細胞株。本試驗所制備Mo6＋－EDTA－mAb為高親和力抗體。

3.關于交叉反應性mAb的交叉反應性表示mAb與競爭物結合的結構特異性，是揭示參與反應混合物與其交叉結合的重要化學參數。本試驗所制備的Mo6＋－EDTA　mAb除與Cr3＋－EDTA有較強的交叉反應性外，與其他金屬螯合物和EDTA無交叉反應；Khosraviani　M等建立的水樣中Cd2＋間接競爭ELISA檢測方法，也與Hg2＋具有較強的交叉反應；王建華等所建立的鉬離子多克隆抗體ELISA競爭法，也表現出與汞離子有較強的交叉反應。Jones　R　B等采用距離矩陣法（distancematrix，DM）比較不同金屬－螯合劑復合物分子三維結構的差異，發現Cd2＋－EDTA與Hg2＋－EDTA的三維結構差異最小，認為這可能是抗體對Hg2＋產生交叉反應的主要原因。Love　R　A等認為，螯合劑與金屬離子通過化學鍵結合而使螯合劑的構型發生改變，螯合劑結合不同金屬離子具有不同的構型，螯合劑的構型是決定抗原抗體識別的重要因素。本試驗中Mo6＋－EDTA與Cr3＋－EDTA親和性高，可能是鉬鉻在同一副族，離子半徑相近，原子結構相似，化學性質接近的原因。

作者：范國英 王自良 姜金慶 黃華國 張海棠 丁菡 李藝